EB病毒微生物学检验 技术前沿 北纳生物

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  • 发布时间:2019-08-24
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简介 (一)检验程序检验程序同图29-1。 (二)标本的采集5~10ml肝素抗凝血可用于病毒培养、转化、中EBV抗原的免疫染色检测,标本采集后应尽快检测。 EBV抗原检测标本可在4℃保存

EB病毒微生物学检验 技术前沿 北纳生物

(一)检验程序检验程序同图29-1。

(二)标本的采集5~10ml肝素抗凝血可用于病毒培养、转化、中EBV抗原的免疫染色检测,标本采集后应尽快检测。 EBV抗原检测标本可在4℃保存24小时。

核酸检测标本主要有、脑脊液和活检,培养采集含漱液、唾液和血液等,以含漱液为主。 含漱液在无的平衡盐离子溶液中运送。 用于核酸检测的活检组织采集后放入低温生理盐水或平衡盐离子溶液。

建议活检或冰冻切片在甲醛中浸泡固定后再行检测。 (三)标本直接检查1.显微镜检查由于EBV呈常态性潜伏,组织中的病毒颗粒数量少,难以达到显微镜检测要求,故很少用此方法。 2.抗原检测EBV抗原检测的目标抗原有很多种,如EBNA1、EBNA2、LMP1、LMP2、BHRF1、BZLF1、BMRF1。 EBNA1是唯一可在所有EBV感染的细胞中表达的抗原,在抗原检测中应用较多。

免疫组化法EBV抗原检测敏感性较低、操作繁琐,临床很少使用。 3.核酸检测核酸检测是EBV诊断的重要技术,检验方法有很多种,包括原位杂交、斑点印迹杂交、Southernblot杂交和核酸扩增等。 方法的选择与疾病相关。 原位杂交技术是将EBVDNA或RNA杂交至与其互补的核苷酸序列探针,清除未杂交探针,杂交探针通过标记的基团自显像或色谱分析而被确定。

EBER作为在所有感染细胞中均高表达的EBV特异性小片段RNA,成为最常用的探针结合序列。 EBER原位杂交检测敏感性很高、速度快,己成为检测组织切片中EBV潜伏感染和判断肿瘤是否与EBV相关的“金标准”。 PCR技术包括普通PCR、槽式PCR、多重PCR和荧光定量PCR等,都需要选择特异性高的EBV靶基因。 荧光定量PCR是对患者体内EBV病毒载量进行监测的最为流行的方法。

(四)分离培养和鉴定EBV培养是将经过滤的唾液或含漱液接种于新鲜的人脐带血淋巴细胞,37℃培养4周,若出现大量的转化淋巴细胞,提示病毒培养阳性,需要对培养物进行鉴定。

由于EBV分离鉴定耗时长而且需要特殊的培养细胞,不宜作为常规检验方法,主要用于EBV感染的发病机制、预防和治疗等研究。

采用免疫荧光技术或核酸检测等技术,检测转化淋巴细胞中的EBV抗原或DNA,进行阳性培养物EBV鉴定。 (五)血清学检测常用感染学标志物包括抗VCA及,抗EAIgG、抗EBNA1IgG和抗EBNA2IgG。 原发感染急性期,抗VCAIgM及IgG同时迅速升高,随后抗IgM逐渐减少,约4周后消失,抗IgG抗体终身存在。 抗EAIgG在急性感染后3~4周出现并升高,随后逐渐减少,3~6个月后消失。

抗EBNA1约在原发感染3个月后出现,一般终身存在,抗EBNA2IgG在抗EBNA1IgG之前出现并升高,随后逐渐减少,3~6个月后消失。

来源:北纳细胞网。